Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

автор Njusja Чт Июл 03, 2014 6:42 pm

ВВЕДЕНИЕ

Осмотр сук и кобелей следует проводить за 3 недели перед вязкой. Кобель, от которого в предыдущую вязку родились здоровые щенки, не нуждается в подтверждении фертильности. Однако если с момента последней фертильной вязки прошло более года или возраст производителя превышает 7 лет, рекомендуется все же его обследовать. Клиническое обследование должно включать в себя оценку общего состояния здоровья, анализ семенной жидкости, осмотр пениса и препуция и пальпацию простаты, семенников и придатков семенников. У сук оценивают общее состояние здоровья, убеждаются в том, что проведены вакцинации и дегельминтизация. Осмотр наружных половых органов включает инспекцию влагалища и преддверия влагалища на наличие стриктуры, стеноза или сохранения гимена. Для вычисления оптимальных сроков вязки проводят исследование вагинальных выделений и/или тест на концентрацию прогестерона.

ПСИХОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЯЗКИ

Перед проведением искусственного осеменения –в случае вероятных проблем при вязке — как владелец животного, так и ветеринарный врач должны учесть психологические и физиологические механизмы нормальной вязки. Тем более что психологию взаимоотношений во время вязки понимают далеко не все заводчики. Дня вязки суку доставляют к производителю, а не наоборот; соблюдение этого условия особенно важно в случае, если речь идет о первой вязке молодого кобеля. Желательно, чтобы пару молодому кобелю составляла опытная сука, и наоборот — партнеры для неопытной суки был выбран зрелый кобель.

Между кобелем и сукой складываются определенные взаимоотношения, возникает симпатия или, наоборот, неприязнь, которая может принести к тому, что кто-то из партнеров откажется от коитуса. Социальный статус кобеля или суки и фактор доминирования также способны создавать проблемы. Молодой самец, занимающий подчиненное положение, в обществе доминирующей суки испытывает робость, которая оборачивается трудностями при попытке совершить садку или интромиссию. Доминирующая сука даже в период эструса может подавлять такого партнера, вынуждая его отказаться от вязки, зато охотно спарится с кобелем, занимающим доминирующее положение. Поскольку существуют проблемы, причины которых выходят за рамки физиологии, целесообразно рассмотреть некоторые психологические факторы.

ПРОЯВЛЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ У СУК

Часто признаки приближения течки становятся заметны за несколько недель до наступления проэструса. Сука заигрывает или делает садку на других собак — как на кобелей, так и на сук. У нее снижается или, наоборот, повышается аппетит, она начинает чаще мочиться, проявляет непослушание, хуже ведет себя во время дрессировки. Для опытного заводчика такое поведение является сигналом, что приближается течка.

В период проэструса у суки повышается интерес к общению с другими собаками. Но на приближение кобеля она реагирует пассивно, может даже укусить и отогнать его, если он попытается ее обнюхать. В конце проэструса поведение меняется. Сука становится игривой, проявляет инициативу в общении с самцами, позволяет им обнюхивать себя. Начало эструса отмечается характерным поведением, например, сука стоит, помахивая хвостом, и отводит его в сторону. Некоторые суки при обнюхивании самцом приподнимают круп, демонстрируя вульву. Когда кобель кладет лапу на спину суки, она прогибается (лордоз) и может сама заигрывать с ним (толкать носом, класть лапу на спину, имитировать садку), если он по какой-то причине проявляет робость. Во время вязки сука стоит спокойно, широко расставив задние лапы, приподняв круп и отведя в сторону хвост.

ПРОЯВЛЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ У КОБЕЛЕЙ

Молодые кобели демонстрируют садку с самого раннего возраста (с 4-5 недель), это считается нормой, Такая активность важна для кобеля и является тренировкой полового поведения. Кроме того, садка на других собак или неодушевленные предметы способствует половому созреванию. Однако подобное поведение необходимо решительно пресекать, если оно направлено на людей, а особенно на детей.

Феромоны, содержащиеся в вагинальных выделениях и моче течкой суки, привлекают кобелей даже на значительном расстоянии и побуждают их следовать за ней. При совместном содержании кобель зачастую даже отказываться от пищи и воды, если у суки течка. На это время его лучше удалить. Некоторые кобели проявляют склонность к голосовому выражению возбуждения и воют без устали целыми днями. Другие пытаются убежать от хозяев, выбив с этой целью дверь или окно, сделав подкоп или перепрыгнув через изгородь; на пресечение таких попыток они нередко отвечают деструктивным поведением. У кобелей, страдающих заболеваниями предстательной железы (например, кистозной гиперплазией), наблюдаются кровянистые выделения из пениса, объясняющиеся разрывом из-за возбуждения, заполненных кровью кист.

Поведение кобеля и принимаемые им позы при встрече с течкой сукой обычно свидетельствуют об игривом настроении с примесью опасения, последнее напрямую зависит от социального статуса кобеля. Он приближается к суке, помахивая хвостом, насторожив уши, избегает смотреть на нее пристально. Если она позволяет ему приблизиться, кобель вылизывает ей уши и морду, обнюхивает ее, кладет ей на спину лапу или голову. Если сука не проявляет дружелюбия, кобель может начать игру, дабы усыпить ее бдительность, он припадает к земле или предлагает суке догнать его.

НОРМАЛЬНАЯ ВЯЗКАСостоит из 6 этапов:1. Садка.

2. Кобель совершает активные движения и интромиссию — начальная эрекция.

3. Эрекция — набухание головки полового члена — отделение первой фракции эякулята (прозрачный секрет предстательной железы).

4. Эякуляция — отделение второй фракции (белая, содержащая сперму жидкость) — ротация.

5. Замок — продвижение спермы — отделение третьей фракции (прозрачный секрет предстательной железы).

6. Разрыв замка и окончание вязки.Садка

Если сука подпускает кобеля (фиг. 1). он обхватывает ее круп передними лапами и совершает характерные движения. Неопытный кобель обычно контролирует свои движения, пытаясь сориентировать пенис и обнаружить вульву суки. Начальная эрекция обеспечивает интромиссию с помощью кости полового члена. При контакте с вульвой движения кобеля активизируются.

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис 1. Садка

ИнтромиссияПосле введения пениса в вульву движения кобеля становятся более активными и энергичными. Он переступает с ноги на ногу (приплясывает), слегка приподнявшись над сукой.Эрекция и набухание головки полового члена

За время этой стадии достигается полная эрекция. Происходит удлинение головки полового члена, луковица остается закрепленной на кости пениса, тогда как pars longa glandisперемещается вперед поверх кости полового члена. Луковица набухает, обеспечивая сцепление пениса с влагалищем суки (замок). Звуки, издаваемые течкой сукой, и ее запах стимулируют эрекцию, которая возникает благодаря импульсам, поступающим из возбуждающих (тазовых внутренностных) нервов, состоящих из парасимпатических волокон таза и крестцовых нервов. Нерные импульсы обеспечивают расширение наружных и внутренних срамных артерий, ведущих к пещеристым телам пениса; сокращение седалишноуретральных мышц предотвращает отток венозной крови. Кровь задерживается в синусах пещеристой ткани луковицы, вызывая ее набухание. Сокращение седалишно-кавернозной и луковично-губчатой мыши, а также констрикиия вульвы во время замка поддерживают интенсивность эрекции. В ходе этой фазы выделяется первая фракция эякулята (1—2 мл прозрачного секрета простаты).

Эякуляция и ротацияЭякуляция

По достижении полной эрекции происходит отделение второй фракции, содержащей сперматозоиды (1-2 мл). Этот процесс занимает 1-2 минуты. Эякуляция происходит в результате стимуляции нервных окончаний пениса. Сперма с секретом предстательной железы выбрасывается благодаря сокращениям мускулатуры, окружающей уретру, в частности, булъбокавернозной и седалишнокавернозной мышц. Как правило, на этой стадии самец прекращает активные движения, что совпадает с началом эякуляции.

Ротация

Самец поднимает одну лапу и поворачивается вокруг своей оси, принимая положение «хвост к хвосту» (Рис.2), при этом головка пениса остается в первоначальном положении. Эластичный участок пениса, расположенный позади головки, обеспечивает разворот на 180 градусов. Разворот не причиняет животному дискомфорта, поскольку кость полового члена препятствует обтурации уретры во время эрекции и разворота. Согласно существующему предположению ротация вызывает окклюзию главной вены пениса и тем самым предотвращает прекращение эрекции. Некоторые кобели не совершают разворота, другие остаются в положении садки, что может причинять суке определенные неудобства, особенно если самец отличается крупными размерами; в таких случаях его осторожно приподнимают, облегчая положение самки.

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис. 2 Ротация

Замок

Во время замка кобель обычно стоит спокойно в положении «хвост к хвосту» (Рис.3). На данной стадии происходит эякуляция третьей фракции семенной жидкости (5-20 мл секрета предстательной железы). Одновременно с движениями хвоста происходят ритмичные сокращения перинеальной мускулатуры.

Рис. 3Замок

Замок продолжается от 10 до 45 минут, однако автор статьи наблюдал замок, длившийся не менее часа. Насколько можно судить, продолжительность замка не оказывает влияния на результаты вязки. Оплодотворение происходит и при отсутствии замка, после эякуляции второй фракции эякулята, содержащей сперматозоиды, т.е. после окончания самцом толчкообразных движений. Существует предположение, что отсутствие замка сказывается на численности помета, однако, по наблюдениям автора, такое мнение ошибочно.

Во время вязки (садки, интромиссии и замка) опытные суки стоят спокойно. В некоторых случаях сука может попытаться уйти, увлекая за собой кобеля. Обычно такое поведение не причиняет вреда животным, однако разумнее придерживать суку за ошейник, предотвращая подобную попытку.

Разъединение замка

Перед разъединением эрекция головки полового члена спадает, и партнеры расходятся. Обычно самец вылизывает пенис, который после этого втягивается в препуций. Если между отверстием препуция и пенисом оказалась шерсть или туда попала кожа внешнего слоя препуция, вызывая болезненные ощущения, самцу оказывают помощь. Полная ретракция пениса достигается нажатием на препуций в 2-3 см позади отверстия входа, вызывающим раскрытие отверстия.

После вязки сука обычно энергично вылизывает влагалище, удаляя вытекшую сперму. Некоторые самки могут демонстрировать побуждение, прыгать и играть или кататься по земле. Останавливать животное или не позволять ему мочиться нецелесообразно, поскольку во время замка большая часть эякулята уже попала в матку и маточные трубы.

АНОМАЛЬНАЯ ВЯЗКАПроблемы, связанные с сукой

Несмотря на то, что сука подпускает кобеля и позволяет ему совершить салку, при некорректном выборе сроков вязки могут наблюдаться трудности, обусловленные значительным отеком влагалища. Кобель не в состоянии внести пенис достаточно глубоко, в результате достичь замка не удается. Часто повторная попытка, предпринятая на следующий день, оказывается вполне успешной. Если животные молодые и неопытные, то кобелю следует оказать помощь, поддерживая его за круп, направляют пенис во влагалище.

Некоторые суки, обычно спокойные и мирные, могут паниковать во время интромиссии, проявлять агрессию по отношению к самцу и даже пытаться укусить владельца. В некоторых случаях целесообразно применение транквилизаторов или проведение искусственного осеменения, хотя в последнем случае следует принимать во внимание существующие в Kennel Club правила регистрации щенков, родившихся в результате искусственного осеменения.

Констрикция кольцевых мышц влагалища, вызванная ригидностью гимена или стриктурой, препятствует полной интромиссии. Сохранение гимена характерно для молодых самок; дефект устраняют, введя палец в перчатке во влагалище. В некоторых случаях может возникать необходимость в хирургическом удалении гимена, однако образование рубцовой ткани может спать источником проблем при родах. Искусственное осеменение является наилучшей альтернативой при стриктуре влагалища или сохранении гимена, если имеющийся просвет позволяет ввести соответствующие инструменты

Отек слизистой оболочки влагалища, наблюдаемый на стадии эструса, может приводить к ее чрезмерному набуханию и пролапсу. Гиперплазия слизистой препятствует совершению коитуса, а часто и введению инструментария искусственного осеменения. Для лечения назначают вяжущие препараты и дезинфицирующие растворы, при тяжелых поражениях рекомендуется хирургическое удаление гипертрофированой ткани. Неосложненная гиперплазия слизистой влагалища, как правило, регрессирует после окончания эструса, однако у таких животных наблюдается тенденция к рецидивам заболевания в следующую течку. По этой причине склонных к гиперплазии слизистой влагалища не используют в племенном разведении.

Проблемы, связанные с кобелём.Одной из наиболее распространенных проблем, вызывающих затруднения но время вязки, является неопытность самца. В подобных случаях кобель нередко пытается совершить интромиссию в области анального отверстия или ниже пульпы. Молодые кобели зачастую испытывают перевозбуждение, приводящее к преждевременной эрекции головки пениса, препятствующее интромиссии. На стадии начальной эрекции происходит -эякуляция секрета простаты. Эякуляция второй фракции происходит позднее. Необходимо временно разлучить самца с партнершей и дать ему успокоиться, а через 30 минут предпринять вторую попытку. В случае неудачи наилучшим выходом является искусственное осеменение.

В редких случаях молодые кобели неспокойны к совершению коитуса из-за фимоза, всованного адгезией пениса и препуция или стриктурой отверстия препуция. В обоих случат необходимо хирургическое вмешательство.|

Отсутствие либидо у самца может быть обусловлено целым рядом причин, к которым относится неприязнь к половому партнеру, ошибка в выборе сроков вязки, гипоплазия тестикулов, заболевания предстательной железы, мочевые конкременты (редко), баланопостит, эпидидимит, вертебральный артроз (часто встречается у собак таких пород, как датская гончая и пекинес), заболевания нижнего отдела позвоночника (спондилез у боксеров) и задних конечностей (дисплазия тазобедренного сустава). Для выявления причины проводят клиническое исследование. Если либидо снижено из-за психологических проблем, замена партнерши может исправить ситуацию. При сохранении возбуждения самца спаривают с другой самкой собирают сперму для искусственного осеменения. В тех случаях, когда обнаружены заболевания предстательной железы, мочевые конкременты, эпидидимит и баланопостит, проводят соответствующее лечение. Если проблемы с либидо объясняются наследственными заболеваниями, необходимо обсудить с владельцем этическую сторону вопроса и объяснить, почему животных с генетическими дефектами не используют в племенном разведении.

СБОР И ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫСбор спермы

К условиям, обеспечивающим сбор спермы, относятся: присутствие раздражителя — обычно самки, находящейся в состоянии течки (предпочтительнее всего на

автор Njusja Чт Июл 03, 2014 6:44 pm

пике эструса, но если сука будет вести себя спокойно, подойдет любая стадия); отдельное помещение и выход на площадку, на случай, если самец предпочитает предварительно поиграть с самкой; минимальное количество людей. Перечисленные условия благоприятно сказываются на параметрах спермы и значительно облегчают процедуру.

Кобелю дают возможность совершить садку, при выдвижении пениса из препуция оператор отводит последний назад и сдавливают пенис пальцами каудально от головки (Рис.4).

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис. 4 Сбор спермы с использованием течной суки в качестве раздражителя. Оператор отводит препуций, захватывает лукавицы в ладонь, а пальцами сжимает основание полового члена позади луковиц. Сперму собирают непосредственно в пластиковую пробирку.

Сбор спермы невозможен до достижения полной эрекции и прекращения толчкообразных движений самца. Для сбора спермы чаще используют одноразовую воронкообразную пластиковую чашу. При проведении манипуляции необходимо исключить вероятность травмирования пениса о край сосуда. Такая травма может приводить к разрыву мелких сосудов головки пениса и попаданию крови в эякулят. Особенно склонны к кровотечениям старые собаки. Неизвестно, как присутствие крови сказывается на параметрах спермы, однако ее наличие затрудняет анализ. В идеале образец должен состоять, из второй фракции (содержащей сперматозоиды ), особенно если сперму предполагается замирозить. При немедленном использовании для искусственного осеменения в пробирку со спермой добавляют 1-2 мл секрета предстательной железы и применяют без дополнительных растворителей.

Анализ спермы

При проведении анализа определяют цвет семенной жидкости. Нормальным считают оттенки от молочного до слабо-кремового и зависимости от плотности; желтый оттенок недопустим и указывает на попадание мочи или на воспалительный процесс; красный свмдетельствует о присутствии крови. Причину отклонения цвета эякулята от нормы выявляют в ходе микроскопического исследования. Эякулят, содержащий лейкоциты, эритроциты или мочу, центрифугируют при 300-1000 об/мин в течение 5 минут в разбавителе ТRIS (табл.1) или растворе с добавлением антибиотиков, супернатант удаляют, а осадок снова разводят в свежем разбавителе, содержащем антибиотики, и используют для искусственного осеменения.

Тригидроксиметиламинометан	6,056 г
Лимонная кислота	3,400 г
Фруктоза	2,500 г
Дистиллированная вода двойной очистки	200 мл
Кристаллический пеницилин	200 000 ЕД
Дигидрострептомицин	0,2 г
Яичный желток вводят непосредственно перед добавлением воды(20% объема) 2мл желтка на 8 мл TRIS базы+антибиотики

Табл.1. Состав раствора ТRIS без глицерина, предназначенный для транспортировки охлажденной спермы. Буферная база содержит антибиотики.

Оценку плотности спермы, т.е. концентрации сперматозоидов на единицу объема проводят с использованием счетной камеры и микроскопа или фотометрического счетчика для спермы (Рис.5). Количество сперматозоидов и эякуляте вычисляют исходя из их числа в единице объема и полного объема. Общее количество сперматозоидов в сперме собак варьирует от 200 до 1200х 10⁶, содержание во второй фракции 100-700 х 10⁶ /мл.

Для транспортировки свежесобранной спермы в последнее время с успехом применят да вида разбавителей (табл.1 и 2).

В эксперименте было проведено сравнение разбавителей, содержащих яичный желток, яичный желток в сочетании со сметаной и яичный Прогрессивную подвижность оценивают визуально под микроскопом со 100-кратным увеличением. Показатель прогрессивной подвижности (количество сперматозоидов с выраженным поступательным движением) минимально может составлять до 5% при норме 75-90% в неразбавленном свежесобранном эякуляте.

В замороженной сперме, если ее предполагается использовать для искусственного осеменения, подвижность сперматозоидов после размораживания должна составлять не менее 50%. Активность сперматозоидов (скорость поступательного движения) также является важным показателем, которому субъективно присваивается значение от 0 до 5, где 0 означает отсутствие прогрессивного движения (некроспермия), а 5 является наивысшим показателем. Нормальная фертиль-ная сперма обычно имеет показатель 3-5; сперма, предназначенная для замораживания, перед заморозкой должна иметь высокие показатели, предпочтительно 5. Низкая температура снижает подвижность сперматозоидов, поэтому для анализа рекомендуется подогревать предметное стекло, в особенности при работе с размороженной спермой.

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис.5. Фотометрический калибратор Spermacue^TM для измеренияплотности (количества сперматозоидов в мл) свежеполученной неразведенной спермы собак и лисиц.

Физиологические растворы, особенно содержащие глицерин, также временно снижают активность сперматозоидов, однако на подогретом предметном стекле она обычно восстанавливается через 2-3 минуты.

В последнее время достаточно широко применяют тест на целостность мембраны и жизнеспособность спермы (гипоосмотический тест). Тест включает инкубацию спермы в гипоосмотической среде, вызывающей набухание хвоста сперматозоида. Этот тест имеет хорошую корреляцию с подвижностью и жизнеспособностью спермы, но не с ее концентрацией.

Морфологический анализ служит для определения процента сперматозоидов с нормальным внешним видом либо с помощью фазово-контрастной микроскопии при 200-кратном увеличении, либо с использованием менее мощного микроскопа, но тогда с окрашиванием нигрозин- эозином. Морфологические показатели считают нормальными, если процентное соотношение морфологически неизмененных сперматозоидов колеблется в пределах пределах от 65 до 90%. Минимальный процент морфологически нормальных сперматозоидов, при котором сохраняется нормальная фертильность, для собак не установлен, однако показатель ниже 60% обычно указывает на нарушения функции тестикул или эпидидимиса. У кобелей в период полового созревания до 40% сперматозоидов могут иметь проксимальные цитоплазматические включения. Сперма, предназначенная для замораживания, должна содержать не менее 75% морфологически нормальных сперматозоидов.

Показатель целостности акросом особенно важен для морфологической оценки спермы после размораживания. Для подсчета сперматозоидов с неповрежденной акросомой в лаборатории автора применяют окрашивание раствором Spermaс™.

Сохранение спермы

Для искусственного осеменения свежесобранной спермой ее разбавлять необязательно. Однако если предполагается транспортировка спермы и использование через 2—3 часа, ее разбавляют специальными разбавителями и транспортируют при температуре 4 °С, поскольку такие условия способствуют поддержанию жизнеспособноcти сперматозоидов. желток в сочетании с молоком. Для хранения спермы при 4 °С лучше всего подходит разбавитель ТRIS. Во всех растворах желток предохраняет мембрану сперматозоидов от шока, вызываемого воздействием низкой температуры. Разведение спермы обычно проводят в соотношении 1:6 в зависимости от первоначальной концентрации Важно, чтобы объем раствора превышал объем спермы, и если при сборе сперму не разделили на фракции, ее центрифугируют и, удалив излишки секрета предстательной железы, смешивают с раствором.

Пастеризованные сливки 12%жирности	8 мл
Яичный желток 20% от объема	2мл

Табл. 1. Желточно-сливочный разбавитель для свежеполученной охлажденной спермы.

Охлаждение при транспортировке обеспечивают, помещая образец в термос, частично заполненный колотым льдом. Для перевозки образца используют пластиковые пробирки для центрифугирования (например,

пробирку на 10 мл с завинчивающейся крышкой для клеточной культуры).

Пробирку с образцом помешают в изолированную колбу, колбу кладут в термос поверх слоя льда и оборачивают бумагой. Перед осеменением сперму постепенно согревают до 30-35 С.

ОБРАБОТКА И ЗАМОРАЖИВАНИЕ СПЕРМЫ СОБАКПодготовка и разбавление

Для замораживания к основному раствору TRIS добавляю глицерин и антибиотики (табл. 1). Объем добавляемого глицерина составляет от 12 до 16 мл (6 и 8% общи о объема соответственно) в зависимости от техники замораживания: для автоматического замораживания добавляют 6% глицерина, для ручного — 8%. В раствор добавляют дистиллированную воду (188 или 184 мл вместо стандартных 200 мл).

В базовый раствор ТRIS с глицерином добавляют 20% яичного желтка. Яичный желток получают от кур, проверенных па отсутствие патогенных факторов (предназначенных на экспорт или домашних). Желток отделяют от белка, выкладывают на лист чистой бумаги, осторожно прокалывают и сливают в воронку и энергично взбивают стеклянной лопаткой, максимально измельчая его частицы, — это позволяет снизить связывание головок сперматозоидов частицами спермы. Наконец, желток смешивают с буферным раствором TRIS до 30 С. Смесь хорошо взбалтывают и нагревают до 35 С. Предварительно приготовленный разбавитель можно замораживать и сохранять в таком виде в течение 2 месяцев. Перед применением его размораживают на водяной бане при температуре 35 С.

Проводят микроскопическое исследование спермы на соответствие перечисленным выше критериям, затем ко второй фракции эякулята добавляют по каплям подогретый до 35 С разбавитель, пока необходимая концентрация не будет достигнута. В лаборатории для замораживания обычно используют образцы с общей концентрацией сперматозоидов до 100×10 ⁶/мл. Однако можно уменьшить наполовину.

Охлаждение.

После разбавления несколько капель образца исследуют сперму под микроскопом, а разбавленную сперму сливают в пластиковые центрифужные пробирки, которые помещают в сосуд с водой, подогретой до 35С. Затем сосуд переносят в холодильник и оставляют на 2 часа при температуре 4С. За это время сперма охлаждается до 4-5 С, а глицерин, выполняющий роль защитного фактора, проникает в мембрану сперматозоидов.

Упаковка

Сперму вынимают из холодильника, осторожно взбалтывают и немедленно помещают в пластиковые соломины (пайетты) емкостью 0,5 мл. Для выполнения процедуры применяют специальный отсос или насасывают ртом через латексную трубку. При распределении спермы следует проследить за тем чтобы порошок, находящийся между концами фильтров соломины, пропитался жидкостью и затвердел. Сначала соломины заполняют наполовину, после чего, оставляя пузырек воздуха, доливают, не доводя 1 см до верха. Пузырек воздуха препятствует переливанию спермы (за счет изменения давления при размораживании). После этого соломину запечатывают.

Техника замораживания

Существуют два альтернативных метода заморозки — ручная и автоматическая. Доля глицерина в составе разбавителя зависит от применяемого метода. При ручной заморозке используют контейнер (30 х 40 х 30 см) из полистирола со съемной металлической полкой, помешенной на 10 см ниже края. Контейнер заполняют жидким азотом до уровня, находящегося на 4 см ниже полки.

Заполненные соломки (8-10 максимально) захватывают пинцетом, помещают горизонтально на полку и оставляют в испаряющемся азоте на 8 минут. Затем пинцет охлаждают в жидком азоте, приподнимают и поворачивают с его помощью пайетты, одну за другой, чтобы удостовериться в полной кристаллизации их содержимого . После этого пайетты погружают в жидкий азот. Такую процедуру называют статической в связи с присутствием постоянного нерегулируемого потока испаряющегося азота в период охлаждения и заморозки.Автоматическая заморозка подразумевает использование машины. Такой способ называют динамическим, поскольку испаряющийся азот поступает в морозильную камеру с различной скоростью в зависимости от заданной программы, позволяющей регулировать темпы заморозки. Пайетты замораживают в горизонтальном положении на полке со съемной крышкой, причем в морозильной камере может находиться несколько таких полок. Программа заморозки включает следующие режимы:
• -2 0С/мин, начиная с +4 0С до -7 0С• -50 0С /мин, от -7 0С до -100 °С• -25 0С /мин, от-100 0С до-180 0С.после окончания процедуры полку помещают непосредственно в жидкий азот.РазмораживаниеПайетты размораживают на водяной бане (в термосе) при температуре 70 "С в течение 8 секунд. После размораживания их ставят вертикально фильтром вниз, распечатывают крышку, встряхивают, чтобы пузырек воздуха мог подняться вверх. Соломку вскрывают и несколько капель образца помещают на подогретое предметное стекло для оценки параметров спермы после размораживания. До восстановления подвижности сперматозоидов проходит некоторое время, обычно 2 минут бывает достаточно. В связи с тем, что разные лаборатории используют различные техники замораживания, при размораживании образца спермы, полученного из какой-то определенной лаборатории, необходимо строго соблюдать все полученные оттуда рекомендации, поскольку процессы замораживания и размораживания тесно связаны между собой.ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕИскусственное осеменение свежей спермой. Практикуется в случаях, если естественная вязка невозможна по ряду причин: кобель и сука живут довольно далеко друг от друга; заводчик намерен осеменить несколько сук или опасается прямого контакта суки с производителем в связи с распространенностью инфекционных заболеваний.Искусственное осеменение замороженной спермыПри наличии свежей спермы процедуру осеменения проводят в день овуляции, а потом через2 дня повторяют. При использовании замороженной спермы, которая характеризуется сниженной жизнеспособностью, поскольку процессы замораживания и размораживания оказывают негативное воздействие на акросомы и мембраны сперматозоидов, — осеменение осуществляют через 1 -2 дня после овуляции, и вторую процедуру проводят через 24 часа после первой. Пробы прогестерона в сыворотке крови служат хорошим индикатором овуляции. Концентрация прогестерона, определяемая радиоиммунным методом, должна поддерживаться на
уровне 30 нмоль/л (10 нг/мл) в первый день и между 55 и 75 нмоль/л (18-25 нг/мл) на второй день осеменения. Быстрый иммуноферментный метод определения также подходит для оценки качественного и колличественного содержания прогестерона.
Техника осеменияСвежую сперму вводят во влагалище с помощью жесткого пластикового катетера, применяемого для осеменения коров, но укороченного до нужного размера. Катетер снабжен шприцем на 2-5 мл с резиновым поршнем. (рис. 6). Необходимо иметь в виду , что не всякий шприц можно использовать, поскольку некоторые типу резин оказывают токсическое воздействие на сперматозоиды.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис. 6 Три различных вида катетеров с нейлоновой направляющей трубкой, используемых для трансцервикального внутриматочнаго искусственною осеменения собак. Внизу — обычный пластиковый катетер для коров, , укороченный до необходимой длины для интра- вагинального осеменения у собак.

Вводимый объем не должен

автор Njusja Чт Июл 03, 2014 6:45 pm

превышать 3 мл для крупных пород и 2 мл для мелких, в противном случае сперма может вытекать из половых путей самки. Вульву приподнимают указательным стиковый катетер. После введения каудальной конец каетера приподнимают и ведут вдоль дорсальной стенки влагалища к своду влагалища для того, чтобы избежать попадания катетера в мочевой пузырь, поскольку отверстие уретры располагается на вентральной стенке влагалища. Второй рукой оператор пальпирует шейку матки через брюшную стенку, корректируя продвижение катетера. Сперму вводят медленно, после чего выдерживают самку в течение 10 минут нут в положении с приподнятым крупом. Поглаживание области вульвы вызывает сокращения матки, способствующие продвижению спермы.

Для осеменения свежей и замороженно-оттаяной спермой разработан специальный внутри маточный катетер (Рис.6), состоящий из нейлоновой направляющей и металлического катетера с прикрепленным шпицем. Техника заключается во введении во влагалище направляющей трубки, с металлическим катетером внутри; после того, как трубка коснется свода влагалища, металлический катетер выдвигают вперед и вводят в шейку матки, придерживая ее большим и указательным пальцем через стенку брюшной полости (Рис.7).

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис.7. Искусственное осеменение собаки с помощью внутриматочного катетера. Поверх катетера надета мастиковая трубка, предотвращающая контаминацию влагалищной микрофлорой или травму слизистой влагалища металлическим катетерам.

Канал шейки прямой с незначительными складками и почти полностью раскрыт на стадии эструса, поэтому введение катетера обычно не вызывает затруднений. Для выполнения процедуры животное поднимают на стол, седация обычно не требуетса (Рис. 8).

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис.8. Транцервикалыюе искусственное осеменение. Животное находится на столе. Седация обычно не требуется, процедура занимает менее 5 мин.

Выполнение манипуляции предполагает наличие определенных навыков, занимает у опытного оператора не более 1—2 минут и не причиняет животному дискомфорта. После выполнения внутриматочного осеменения приподнимать тазовую область суки необязательно.

Рекомендуемая доза при внутриматочном осеменении замороженно-оттаявшей спермой составляет 100×10⁶ сперматозоидов на одно осеменение, однако оплодотворение обеспечивается и меньшим количеством сперматозоидов— 35-40 х 10⁶ на одно осеменение при условии корректного выбора даты проведения процедуры и соблюдения технологии размораживания спермы. Доза 100 х 10⁶мл основана на результатах экспериментов автора со спермой лисиц, в ходе которых важным параметром являлась численность помета. При осеменении в ходе лапаротомии можно ограничиться еще меньшим количеством спермы, однако, насколько известно автору, подобные эксперименты не проводились.

Несмотря на возможность интравагинального осеменения при использовании замороженно-оттаявшей спермы наилучшие результаты обеспечивает внутри маточное осеменение, позволяющее к тому же снизить дозу спермы.

Если катетеризация невозможна или оператор незнаком с техникой ее проведения, рекомендуется искусственное осеменение в ходе лапароскопии или с применением эндоскопа. В США и Канаде хирургические методы искусственного осеменения являются наиболее распространенными. Однако в большинстве европейских стран интравагинальное осеменение, а также техники с применением катетера и эндоскопа считают более этичными.

Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Re: Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Re: Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3